组织工程骨修复上颌骨缺损及牙种植一例
作者:哈尔滨市第五医院口腔科(高振涛、李宗瑜、冉庆祥、唐臣);杭州启迪生物科技有限公司技术部(张泽宇);首都医科大学附属北京世纪坛医院中心实验室(崔磊)
近年研究发现,脂肪基质中存在着一类具有多向分化潜能的成体间质干细胞——脂肪干细胞(adipose derived stem cell,ADSC),在体外向成骨、软骨、脂肪、肌肉等多个方向分化。脂肪干细胞体内分布广、分离培养操作简单,较骨髓间充质干细胞bone marrow derived mesenchymal stem cell,BMSC)具有更强的扩增能力且无明显的对血清批号的依赖性,因此ADSC具有更为重要的临床应用价值。本研究经哈尔滨市第五医院医学伦理委员会审核并批准(批准号:哈尔滨市第五医院伦理委员会2012年1号),利用ADSC作为种子细胞诱导构建的组织工程骨修复上颌骨缺损并种植义齿,现报告如下。
1.临床资料:
患者女性,58岁,因交通事故致左上前牙缺失、牙槽突骨折合并骨缺损就诊。检查:颜面基本对称,张口度正常,12缺失,牙龈组织完整,但缺牙区唇侧牙槽突塌陷明显、凸凹不平(图1,2)。CT检查示:12缺失,唇侧牙槽骨缺失8.4 mm×1.0 mm×4.8 mm,并可见散在碎骨。诊断:上颌左侧牙槽突骨折伴缺损、12缺失。将治疗方案与患者及家属充分沟通,知情同意后治疗。
2.脂肪干细胞培养:
患者腹部切取1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm的皮下脂肪组织,生理盐水冲洗后将脂肪抽吸获得物以等体积磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)清洗3遍,离心后吸出PBS,保留上层脂肪组织。加入0.075%的I型胶原酶,在37℃振荡条件下消化60 min。以含10%胎牛血清的基础培养基(Dulbecco’S modified eagle medium,DMEM)培养液终止消化。以1 200×g离心10 min,去上层液及脂肪,所获得细胞以生长培养液重悬,接种于直径100 mm的细胞培养皿中,放人恒温培养箱内37℃、5%CO2、100%湿度条件下常规培养,至70%~80%融合状态时以1:3的比例传代扩增细胞。传至第3代时,用β-磷酸甘油钠(10 nmol/L)、地塞米松(8~10 mol/L)、L-磷酸抗坏血酸(50μmol/L)、L-谷氨酰胺(300 mg/L)、二羟维生素D3(10 mmol/L)对细胞进行成骨诱导。
3.组织工程骨体外构建:
成骨诱导后的人ADSC以5×1010个/L的浓度接种于同种异体脱钙骨(partially demineralized bone matrix,pDMB)(杭州启迪生物科技有限公司)。支架大小为1 cm×2 cm×0.5 cm,支架孔隙率为75%±8%,平均孔径(310±54)mm。按患者术前三维CT镜像确定骨缺损的大小。体外培养3周,倒置显微镜观察细胞在脱钙骨中生长情况。细胞以荧光染料DIO荧光标记,将5μl DIO(Molecular Probes,美国)与1 ml DMEM混匀配制成染液,将细胞重悬于染液中,在37℃培养箱中静置20 min,1 500 r/min离心5 min,弃去染液。接种于脱钙骨,激光共聚焦显微镜观察细胞分布情况。
4.组织工程骨及种植体植入:
经过3周培养出组织工程骨。局部麻醉下按外科常规手术方法暴露骨缺损区,刮除骨碎块和肉芽组织,彻底止血,将工程骨用生理盐水冲洗并修整使其与骨缺损区吻合后,把工程骨龛入缺损区使其边缘和周围正常骨密切接触,见工程骨在缺损区稳固后严密缝合软组织封闭创面,术后应用抗生素7 d。术后定期复查CT。植骨术后5个月,在12缺牙区植入直径3.1 mm、长12 mm种植体(士卓曼,瑞士)1枚。
5.结果:
取自患者皮下脂肪组织的脂肪干细胞,体外生长情况良好,细胞呈长梭形(图3A)。成骨诱导后,茜素红染可见大量钙结节形成(图3B)。细胞经DIO荧光染料标记后,接种于脱钙骨;3周后可见荧光标记细胞均匀分布于孔壁(图3C)。术后1、2、4个月CT显示植骨区新生骨组织的改变区域逐渐扩大,密度逐渐增高。植骨术后5个月植骨区牙槽骨外观丰满(图4),植骨术后5个月植入种植体(图5),种植术后1年种植体与骨组织愈合良好,修复完成(图6)。组织学观察结果显示,形成的组织工程化骨具有正常的骨小梁结构,骨组织中间可见骨陷窝,骨小梁表面黏附活跃的成骨细胞(图7)。
6.讨论:
本病例采用的种子细胞是脂肪源性间充质干细胞,具有来源广泛,取材方便,干细胞量大和易于分离纯化的优点。支架材料的异体脱钙骨具有生物相容性和生物降解性,并保留了胶原支架的立体多孔状结构。同时脱钙骨能为成骨细胞的生长、分化提供良好的基质,并在修复骨缺损时有明显的骨诱导作用。本病例牙间隙过小,因此只对12牙修复,匡未行修复,且到牙倾斜角大,与患者反复沟通将到磨改,烤瓷冠修复,患者不同意治疗方案,虽然美观性差但功能良好。本病例随访的时间尚短,需要长期随访。
来源:中华口腔医学杂志
相关资讯
- 《鼓浪屿之波》钟丽燕
- 追本溯源——早期传统功能矫治器概论
- 徐霞《我心芬芳》
- 颌位关系的垂直高度与水平关系
- 功能性全口吸附性义齿-李方明
- 美国人唱《敖包相会》
- 口腔治疗术前全身系统疾病评估
- 《美丽的草原我的家》钟丽燕
- 口腔各科治疗需要关注牙周健康-北大口腔张凤秋
- 《我不会放弃》杰森·玛耶兹_郑成河
推荐产品
- 宇森根管治疗仪C-Smart-mini AP
- 重新定义无线根管治疗仪 C-SMART Mini AP
- 德国奥一手术种植拔牙车针
- 德国奥一颌面外科手术种植拔牙车针。 科贸嘉友029-88651307 科贸嘉友029-88651307
- 宇森正畸邻面套装
- CX-235,售价1380元,片切手机保修一年,片切砂片保修1个月。